pcr 原理简述(简述PCR基本原理)

张承辉 • 2022-03-29 • 知识

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PCR锛堣仛鍚堥叾閾惧紡鍙嶅簲锛夋妧鏈殑鍩烘湰鍘熺悊绫讳技浜嶥NA鐨勫ぉ鐒跺鍒惰繃绋嬶紝鍏剁壒寮傛€т緷璧栦簬涓庨澏搴忓垪涓ょ浜掕ˉ鐨勫鏍歌嫹閰稿紩鐗┿€侾CR鐢卞彉鎬р啋閫€鐏啋寤朵几涓変釜鍩烘湰鍙嶅簲姝ラ鏋勬垚锛? 鈶犳ā鏉緿NA鐨勫彉鎬э細妯℃澘DNA缁忓姞鐑嚦鈩冨乏鍙充竴瀹氭椂闂村悗锛屼娇妯℃澘DNA鍙岄摼鎴栫粡PCR鎵╁褰㈡垚鐨勫弻閾綝NA瑙ｇ锛屼娇涔嬫垚涓哄崟閾撅紝浠ヤ究瀹冧笌寮曠墿缁撳悎锛屼负涓嬭疆鍙嶅簲浣滃噯澶囥€? 鈶℃ā鏉緿NA涓庡紩鐗╃殑閫€鐏紙澶嶆€э級锛氭ā鏉緿NA缁忓姞鐑彉鎬ф垚鍗曢摼鍚庯紝娓╁害闄嶈嚦鈩冨乏鍙筹紝寮曠墿涓庢ā鏉緿NA鍗曢摼鐨勪簰琛ュ簭鍒楅厤瀵圭粨鍚堛€? 鈶㈠紩鐗╃殑寤朵几锛欴NA妯℃澘寮曠墿缁撳悎鐗╁湪鈩冦€丏NA鑱氬悎閰讹紙濡俆aqDNA鑱氬悎閰讹級鐨勪綔鐢ㄤ笅锛屼互dNTP涓哄弽搴斿師鏂欙紝闈跺簭鍒椾负妯℃澘锛屾寜纰卞熀浜掕ˉ閰嶅涓庡崐淇濈暀澶嶅埗鍘熺悊锛屽悎鎴愪竴鏉℃柊鐨勪笌妯℃澘DNA閾句簰琛ョ殑鍗婁繚鐣欏鍒堕摼銆? 閲嶅寰幆鍙樻€р啋閫€鐏啋寤朵几涓夎繃绋嬪氨鍙幏寰楁洿澶氱殑鈥滃崐淇濈暀澶嶅埗閾锯€濓紝鑰屼笖杩欑鏂伴摼鍙堝彲鎴愪负涓嬫寰幆鐨勬ā鏉裤€傛瘡瀹屾垚涓€涓惊鐜渶锝?灏忔椂灏辫兘灏嗗緟鎵╃洰鐨勫熀鍥犳墿澧炴斁澶у嚑鐧句竾鍊嶃€? 鎵╁睍璧勬枡锛? PCR鍙嶅簲鏉′欢涓烘俯搴︺€佹椂闂村拰寰幆娆℃暟銆傛俯搴︿笌鏃堕棿鐨勮缃細鍩轰簬PCR鍘熺悊涓夋楠よ€岃缃彉鎬ч€€鐏欢浼镐笁涓俯搴︾偣銆傚湪鏍囧噯鍙嶅簲涓噰鐢ㄤ笁娓╁害鐐规硶锛屽弻閾綝NA鍦綖鈩冦€? 鍦═aq DNA鑱氬悎閰剁殑浣滅敤涓嬶紝浣垮紩鐗╅摼娌挎ā鏉垮欢浼搞€傚浜庤緝鐭澏鍩哄洜锛堥暱搴︿负锝炩剝宸﹀彸閫€鐏笌寤朵几锛堟娓╁害Taq DNA閰朵粛鏈夎緝楂樼殑鍌寲娲绘€э級銆? 鍙傝€冭祫鏂欙細鐧剧鑱氬悎閰堕摼寮忓弽搴? PCR鎶€鏈殑鍩烘湰鍘熺悊锛? 璇ユ妧鏈槸鍦ㄦā鏉緿NA銆佸紩鐗╁拰鍥涚鑴辨哀鏍哥硸鏍歌嫹閰稿瓨鍦ㄤ笅锛屼緷闈犱簬DNA鑱氬悎閰剁殑閰朵績鍚堟垚鍙嶅簲銆侱NA鑱氬悎閰朵互鍗曢摼DNA涓烘ā鏉匡紝鍊熷姪涓€灏忔鍙岄摼DNA鏉ュ惎鍔ㄥ悎鎴愶紝閫氳繃涓€涓垨涓や釜浜哄伐鍚堟垚鐨勫鏍歌嫹閰稿紩鐗╀笌鍗曢摼DNA妯℃澘涓殑涓€娈典簰琛ュ簭鍒楃粨鍚堬紝褰㈡垚閮ㄥ垎鍙岄摼銆? 鍦ㄩ€傚疁鐨勬俯搴﹀拰鐜涓嬶紝DNA鑱氬悎閰跺皢鑴辨哀鍗曟牳鑻烽吀鍔犲埌寮曠墿麓鏂瑰悜寤朵几锛屽悎鎴愪竴鏉℃柊鐨凞NA浜掕ˉ閾俱€? 鎵╁睍璧勬枡锛? PCR鎶€鏈殑搴旂敤锛? PCR鎶€鏈娆′复搴婂簲鐢ㄥ氨鏄粠妫€娴嬮暟鐘剁粏鑳炲拰尾鍦颁腑娴疯传琛€鐨勫熀鍥犵獊鍙樺紑濮嬬殑銆? PCR鍦ㄥ尰瀛︽楠屽涓渶鏈変环鍊肩殑搴旂敤棰嗗煙灏辨槸瀵规劅鏌撴€х柧鐥呯殑璇婃柇銆傜悊璁轰笂锛屽彧瑕佹牱鏈湁涓€涓梾鍘熶綋瀛樺湪锛孭CR灏卞彲浠ユ娴嬪埌銆? PCR鎶€鏈笉浣嗚兘鏈夋晥鐨勬娴嬪熀鍥犵殑绐佸彉锛岃€屼笖鑳藉噯纭娴嬬檶鍩哄洜鐨勮〃杈鹃噺锛屽彲鎹杩涜鑲跨槫鏃╂湡璇婃柇銆佸垎鍨嬨€佸垎鏈熷拰棰勫悗鍒ゆ柇銆? 鍙傝€冭祫鏂欙細鐧剧鈥擯CR(鑱氬悎閰堕摼寮忓弽搴旓級 PCR鍘熺悊锛? DNA鐨勫崐淇濈暀澶嶅埗鏄敓鐗╄繘鍖栧拰浼犱唬鐨勯噸瑕侀€斿緞銆傚弻閾綝NA鍦ㄥ绉嶉叾鐨勪綔鐢ㄤ笅鍙互鍙樻€цВ鏃嬫垚鍗曢摼锛屽湪DNA鑱氬悎閰剁殑鍙備笌涓嬶紝鏍规嵁纰卞熀浜掕ˉ閰嶅鍘熷垯澶嶅埗鎴愬悓鏍风殑涓ゅ垎瀛愭嫹璐濄€? PCR鎶€鏈殑鍩烘湰鍘熺悊绫讳技浜嶥NA鐨勫ぉ鐒跺鍒惰繃绋嬶紝鍏剁壒寮傛€т緷璧栦簬涓庨澏搴忓垪涓ょ浜掕ˉ鐨勫鏍歌嫹閰稿紩鐗┿€? 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4銆丳CR鎶€鏈殑鍘熺悊

DNA鐨勫崐淇濈暀澶嶅埗鏄敓鐗╄繘鍖栧拰浼犱唬鐨勯噸瑕侀€斿緞銆傚弻閾綝NA鍦ㄥ绉嶉叾鐨勪綔鐢ㄤ笅鍙互鍙樻€цВ閾炬垚鍗曢摼锛屽湪DNA鑱氬悎閰朵笌鍚姩瀛愮殑鍙備笌涓嬶紝鏍规嵁纰卞熀浜掕ˉ閰嶅鍘熷垯澶嶅埗鎴愬悓鏍风殑涓ゅ垎瀛愭嫹璐濄€傚湪鑱氬悎閰堕摼寮忓弽搴斿疄楠屼腑鍙戠幇锛孌NA鍦ㄩ珮娓╂椂涔熷彲浠ュ彂鐢熷彉鎬цВ閾撅紝褰撴俯搴﹂檷浣庡悗鍙堝彲浠ュ鎬ф垚涓哄弻閾俱€傚洜姝わ紝閫氳繃娓╁害鍙樺寲鎺у埗DNA鐨勫彉鎬у拰澶嶆€э紝骞惰璁″紩鐗╁仛鍚姩瀛愶紝鍔犲叆DNA鑱氬悎閰躲€乨NTP灏卞彲浠ュ畬鎴愮壒瀹氬熀鍥犵殑浣撳澶嶅埗銆傝繖绉嶆壒閲忓鍒禗NA鐨勬妧鏈氨鍙仛PCR鎶€鏈€? 棣栧厛浣犺鐭ラ亾DNA澶嶅埗鐨勫師鐞嗭細銆佷互dNTP涓哄師鏂欙紝鐢盌NA鑱氬悎閰跺偓鍖栧弽搴旓紝鏍规嵁纰卞熀浜掕ˉ閰嶅鐨勫師鍒欒繘琛屽鍒躲€? 鐒跺悗璇磋PCR鐨勫師鐞嗭細1銆丏NA鍙岄摼鍦ㄩ珮娓╀笅涔熶細鍙樻垚鍗曢摼锛堢О涓哄彉鎬э紝鍙樻€ф俯搴︿笌GC鍚噺鐩稿叧锛夛紱2銆佸姞鍏ュ悎鎴愬ソ鐨勫紩鐗╋紙涓€鑸敱鐢熺墿鍚堟垚锛夈€乨NTP鍜孌NA鑱氬悎閰讹紙Taq閰讹紝浠嶵hermus aquaticus缁嗚弻涓彁鍙栫殑鑰愮儹DNA鑱氬悎閰讹級鍙互杩涜DNA鐨勪綋澶栨墿澧炪€? 鑱氬悎閰堕摼鍙嶅簲(polymerasechainreaction锛孭CR)鏄勾缇庡浗CetusMullis绛夊缓绔嬬殑鏈€鏂扮敓鐗╂妧鏈€? PCR鐨勫師鐞哖CR鎵╁棣栧厛闇€瑕佷竴瀵瑰紩鐗╋紝鏍规嵁寰呮墿澧炲尯鍩熶袱绔凡鐭ュ簭鍒楀悎鎴愪袱涓笌妯℃澘DNA浜掕ˉ鐨勫鏍歌嫹閰稿紩鐗╋紝杩欎竴鍗曢摼寮曠墿鐨勫簭鍒楀皢鍐冲畾鎵╁鐗囨鐨勭壒寮傛€у拰鐗囨闀垮害銆侾CR鍙嶅簲浣撶郴鐢卞熀鍥犵粍DNA銆佷竴瀵瑰紩鐗┿€乨NTP銆乀aqDNA鑱氬悎閰躲€侀叾鍙嶅簲缂撳啿浣撶郴鍙婂繀闇€鐨勭瀛愭祿搴︾瓑鎵€缁勬垚銆傚弽搴斿湪鍔犵儹鍙樻€э紝浣垮熀鍥犵粍鍙岄摼DNA鍙樻€т负鍗曢摼(鍙樻€?鍚庯紝閫氳繃闄嶄綆娓╁害浣跨壒寮傛€у紩鐗╀笌浜掕ˉ鐨凞NA搴忓垪鐗瑰紓鎬х粨鍚?閫€鐏垨绉板鎬?锛屽彂鐢熶簡浜掕ˉ缁撳悎鐨勫紩鐗╁湪鑰愰珮娓╃殑TaqDNA鑱氬悎閰朵綔鐢ㄤ笅锛屼互鍩哄洜缁勫崟閾綝NA涓烘ā鏉匡紝浠庡紩鐗╃寮€濮嬫寜鈥滃€嶏紝涓€鑸粡杩囧懆鏈熷氨鑳芥墿澧炰竾鍊嶄互涓娿€?/p>

5銆丳CR鎶€鏈師鐞?

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